该成果以“Immunoregulatory polysaccharides from Apocynum venetum L. flowers stimulate phagocytosis and cytokine expression via activating the NF-κB/MAPK signaling pathways in RAW264.7 cells” 为题发表于Food Science and Human Wellness杂志（即时IF：7.93）。
Introduction
罗布麻（Apocynum venetum L.）是夹竹桃科罗布麻属野生亚灌木。罗布麻花美丽、芳香，花期较长。研究表明罗布麻具有抗高血压、抗氧化、强心、保肝、降脂、抗焦虑和抗抑郁的作用。这些活性多与罗布麻植物中存在的黄酮类化合物有关，而罗布麻中多糖化合物的研究较少。课题组前期从罗布麻花中提取分离纯化了2种新的多糖，分别命名为Vp2a-II和Vp3。本研究通过预实验发现这两种多糖具有促进巨噬细胞RAW264.7释放NO的作用，因此本文以罗布麻花多糖Vp2a-II和Vp3为研究对象，探究其对RAW264.7细胞的免疫调节作用。
Results and Discussion
罗布麻花多糖免疫调节作用检测
图1 Vp2a-II和Vp3对NO释放量和iNOS mRNA的表达水平影响
NO作为免疫系统中最重要的炎症介质之一，可以通过杀灭病原微生物和肿瘤细胞来发挥免疫功能。在正常生理情况下，细胞的iNOS几乎不表达，当巨噬细胞受到细胞因子或LPS的诱导而激活时，细胞内的iNOS表达增加引起NO合成增多。如图1，Vp2a-II和Vp3均可通过激活iNOS的表达，促进细胞分泌NO，且Vp3对NO的调节作用强于多糖Vp2a-II。
罗布麻花多糖免疫调节机制探究
图2 Vp2a-II和Vp3对细胞内NF-κB表达的影响
NF-κB作为巨噬细胞调节免疫应答的一个主要的转录因子，在巨噬细胞中的存在形式主要是p65和p50异源二聚体。在正常细胞中，NF-κB通常与NF-κB抑制剂（IκB）结合存在于细胞质中。当巨噬细胞被激活，不同的上游信号传导途径聚集激活NF-κB抑制剂激酶（IKK）复合物。继而IKK复合物磷酸化I-κB，导致NF-κB从细胞质中释放并转移到细胞核中，激活特定的靶基因。本文通过检测NF-κB p65的表达发现Vp2a-II和Vp3能促进NF-κB从细胞质向细胞核的转移。同时通过NF-κB抑制剂（PDTC）的应用进一步验证了这一结果（如图2）。
MAPK家族包含3种主要的激酶，包括细胞外信号调节激酶（ERK 1/2）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38 MAPK。AP-1是MAPK的下游转录因子，其主要形式为Fos/Jun杂二聚体，AP-1通过调节相关基因的表达来发挥免疫调节作用。同上运用Western blot法检测Vp2a-II和Vp3对细胞内MAPK表达的影响。发现Vp2a-II和Vp3均能上调RAW264.7细胞MAPK蛋白磷酸化水平，但Vp3对p38蛋白的增强作用不明显。使用MAPK信号通路抑制剂PD98059（ERK抑制剂）、SP600125（SAPK/JNK抑制剂）和SB203580（p38抑制剂）预处理细胞，得到同样结果（如图3）。
图3 应用MAPK抑制剂后Vp2a-II和Vp3对蛋白表达的影响
Conclusion
罗布麻花多糖Vp2a-II和Vp3通过对巨噬细胞免疫信号通路的调控而发挥免疫调节作用。罗布麻花多糖Vp2a-II和Vp3通过激活巨噬细胞免疫调节NF-κB和MAPK信号通路，进而促进相关蛋白mRNA的表达，促进促炎性细胞因子和NO的分泌。
图4 罗布麻花多糖激活巨噬细胞的信号通路图
中心对罗布麻花多糖性质相关研究
1. L.L. Wang, X.F. Zhang, Y.Y. Niu, et al., Anticoagulant activity of two novel polysaccharides from flowers of Apocynum venetum L, Int J B Macromol. 124 (2019) 1230-1237. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2018.12.015.